OBSERVACIÓN Y RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES DE CONEJO

OBSERVACIÓN Y RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES DE CONEJO

1. INTRODUCCIÓN TEÓRICA

Un espermatozoide es una célula haploide, con la mitad de ADN que el resto de células del organismo, que constituye los gametos masculinos de animales con reproducción sexual de sexo masculino. Cuando un espermatozoide fecunda un ovulo, de forma interna o externa,  se unen el material genético del óvulo y el espermatozoide formando un cigoto diploide. 

Los espermatozoides son elaborados por espermatogonias, células presentes en los testículos (en mamíferos en concreto en un túbulo llamado epidídimo). Cada espermatogonia se somete a un proceso de meiosis y diferenciación, llamado espermatogénesis. En la primera división meiótica de la espermatogonia, esta da lugar a dos células diploides. En cada una de estas células, antes de la segunda división meiótica, los genes se recombinan, es decir, los cromosomas se intercambian partes para aumentar la variabilidad genética. La segunda división meiótica (donde no hay duplicación del ADN y se obtienen dos células haploides a partir de una diploide) y la fase de diferenciación dan lugar a cuatro espermatozoides a partir de una espermatogonia.

El acrosoma contiene enzimas que rompen la membrana pelúcida del óvulo, con el fin de penetrar en él y formar el cigoto. Ya que ningún espermatozoide más puede entrar a causa de la formación de la membrana de fecundación por la rotura de los granos corticales del óvulo, el espermatozoide que ha entrado primero fusiona su material genético con el del óvulo, dando lugar al cigoto, célula diploide (con cromosomas homólogos cuando la cromatina se condense). Todos los orgánulos del cigoto los aporta el óvulo, excepto los centríolos, aportados por el espermatozoide.

partes de un espermatozoide

El flagelo permite el movimiento en el plasma seminal, fluido producido por la próstata y la vesícula seminal, y rico en fructosa, que nutre a los espermatozoides. Estos obtienen energía gracias al aprovechamiento de este monosacárido en las mitocondrias, ubicadas en la pieza intermedia. Las células reproductoras masculinas junto con el plasma seminal forman el semen.

El citoplasma puede liberar unas gotas citoplasmáticas que circulan por el exterior del flagelo. A causa del peso de estas gotas, los flagelos pueden sufrir lesiones. Además es muy común que parte de los espermatozoides muestren una serie de anomalías, que descartan la posible fecundación.

anomalías en espermatozoides

El aparato reproductor masculino del conejo consta de dos testículos encargados de producir los espermatozoides y las hormonas masculinas (andrógenos). Están envueltos por el escroto cuya función principal es de sujeción y protección de los testículos. Y además regulan el control de la temperatura corporal. Los espermatozoides se almacenan y maduran en el epidídimo, este consta de tres partes cabeza, cuerpo y cola. Ésta última conecta con el conducto deferente, que es el encargado de transportar a los espermatozoides y las secreciones procedentes de las glándulas vesiculares y de la próstata, que forman el semen. El conducto eyaculador es la continuación del colector seminal y recoge las secreciones de las glándulas bulbo uretrales las cuales lavan la uretra de residuos de orina.

La uretra es la prolongación del conducto eyaculador y se corresponde con el cuerpo del pene, órgano básico para la copulación con ausencia de glande.

aparato reproductor masculino

del conejo

2. MATERIAL NECESARIO

- Semen de conejo Orictolagus cuniculus con espermatozoides vivos diluido con   glucosa

- Semen de conejo por espermatozoides fijados con glutaraldehído

- Vagina artificial para obtener la eyaculación del conejo

- Pipeta Pasteur

- Tubo de muestra y papel de aluminio

- Túbulo cónico con tapa

- Microscopio óptico

- Portaobjetos

3. HIPÓTESIS INICIAL

Los espermatozoides de conejo están formados por una cabeza con forma alargada y colas con longitud del triple de esta. La pieza intermedia del espermatozoide se diferencia claramente. A la vista del microscopio,  los espermatozoides presentan un movimiento  fluido y relativamente rápido. podremos observar unos pocos individuos con anomalías.

4. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

Aprender sobre las características físicas y funcionales de los espermatozoides.

Observar aumentados los espermatozoides de conejo, tanto vivos como fijados.

Conocer el método de extracción de esperma en conejos.

Familiarizarse con el material de laboratorio y con el método de experimentación.

5. MÉTODO DE EXPERIMENTACIÓN

1. Se calienta la vagina artificial para su esterilización, para la posterior extracción del esperma de conejo por presión en el glande.

2. Parte del semen se diluye con glucosa, para conservar los espermatozoides vivos; y otra con glutaraldehído, para fijar los espermatozoides.

3. Se introduce el semen con espermatozoides fijados en un tubo cónico con tapa.

4. Se preparan los materiales necesarios en el laboratorio.

materiales necesarios

5. Con la pipeta Pasteur, se coloca una gota de semen en el portaobjetos y se cubre la muestra con el cubreobjetos.

colocando el semen de conejo

en el portaobjetos

6. Del tubo de muestra con semen y glucosa, se extrae otra gota con otra pipeta Pasteur y se coloca en el mismo portaobjetos, tapándola con otro cubreobjetos.

7. Se observan las muestras a 40 y 100 aumentos de objetivo, se fotografían los resultados y se calculan las proporciones de espermatozoides normales y con anomalías.

6.OBTENCIÓN DE RESULTADOS

Espermatozoides de conejo a 10 aumentos de ocular y 40 de objetivo

Espermatozoides de conejo a 10 aumentos de ocular y 40 de objetivo

Espermatozoides de conejo a 10 aumentos de ocular y 100 de objetivo

Espermatozoides de conejo a 10 aumentos de ocular y 100 de objetivo

7. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Los espermatozoides de conejo tienen una cabeza con forma ovalada-redondeada y una cola de longitud 5 veces la de la cabeza. Por lo que respecta al grosor, el de la cabeza es aproximadamente 4 veces el de la cola.

No ha sido posible observar las mitocondrias, el núcleo ni el acrosoma.

Tras la observación de 20 espermatozoides fijados con glutaraldehído, se han podido determinar las siguientes proporciones.

·  ANOMALÍAS DE CABEZA

MACROCEFALIA	MICROCEFALIA	CABEZA SUELTA	NORMAL
10% (2)	5% (1)	10% (2)	75% (15)

·  ANOMALÍAS DE COLA

COLA ENROLLADA	COLA PARTIDA POR GOTA CITOPLASMÁTICA	NORMAL
45% (9)	15% (3)	40% (8)

Espermatozoides con cabezas y colas normales: 25% (5)

Con respecto a los espermatozoides vivos, al estar sometidos a la temperatura de la luz del microscopio, estos nadan con un movimiento con tendencia rectilinia pero no fluido, similar a una vibración.

8.CONCLUSIONES

Los espermatozoides de conejo presentan una longitud de flagelo 5 veces mayor que la de la cabeza.

Un 25% de los espermatozoides no presenta ninguna anomalía de cabeza o cola.

El 40% de los espermatozoides de conejo está libre de anomalías de cola y el 75% de cabeza.

Los espermatozoides en un fluido con temperatura superior a 36º ven su forma de nadar alterada a causa del cambio de temperatura.

9.ERRORES DE LA PRÁCTICA

Cantidad excesiva  de semen en el portaobjetos, cosa que anuló la primera muestra y se tuvo que repetir, quitando tiempo.

La cantidad de semen con espermatozoides fijados vertida inexacta

Espermatozoides dañados por movimientos bruscos o cambios de temperatura.

El conteo de espermatozoides se realizó sobre un número muy bajo de espermatozoides, por lo que los resultados son orientativos y no demasiado concluyentes.

Falta de tiempo.

Material no esterilizado.

10. CONFIRMACIÓN O RECHAZO DE LA PRÁCTICA

La longitud del flagelo del espermatozoide es superior a la esperada. Por otra parte, la cabeza no tiene forma alargada, sino ovalada. No se diferencia la pieza intermedia y el movimiento, a causa del aumento de temperatura, no es fluido, aunque sí rápido. No sólo algunos, sino gran parte de los espermatozoides tienen anomalías de cola y cabeza, en concreto el 75%.