FROTIS DE SANGRE

ELABORACIÓN Y OBSERVACIÓN DE FROTIS DE SANGRE

1. INTRODUCCIÓN TEÓRICA O FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA

Un frotis consiste en la extensión de un fluido corporal, en este caso una gota de sangre, para su posterior observación en el microscopio y análisis clínico. Esta técnica científica se puede realizar con dos cubreobjetos, este método resulta complicado debido a la fragilidad del material y la dificultad de la tinción pero se obtiene un resultado con células distribuidas de forma uniforme. En laboratorios especializados se realiza una técnica de centrifugación para obtener una sola capa de leucocitos y plaquetas distribuidos uniformemente, pero que puede producir aerosoles que supongan un riesgo biológico. Por último, el método de dos portaobjetos o un cubreobjetos y un portaobjetos, es el más utilizado en la práctica diaria en laboratorios y el realizado a continuación. Esta técnica obtiene una muestra menos uniforme que las anteriores, sin embargo es más fácil de realizar.
Resultado de imagen de frotis de sangre tecnica
Foto 0: Técnica del frotis de sangre
 con dos portaobjetos

En esta práctica,  para la fijación de la muestra se utiliza metanol(CH3 OH) el alcohol más sencillo. Este compuesto químico a temperatura ambiente se presenta como un líquido de baja densidad, incoloro, inflamable y tóxico. Se emplea como anticongelante, disolvente y combustible. 
En la tinción de la muestra se utiliza Giemsa (azul de metileno + eosina + colorantes básicos), que permite la observación de diferentes células sanguíneas como leucocitos o glóbulos rojos.
Para más información sobre las células sanguíneas visitar  http://anatomiaaplicadaconisabel.blogspot.com.es/2018/01/celulas-sanguineas.html

2. MATERIAL NECESARIO

- Bata de laboratorio        - Lanceta 
- Guantes                            - Alcohol
- Muestra sangre               - Algodón
- Cubreobjetos                   - Agua
- Portaobjetos                    - Pipeta
- Permanente                     - Metanol
- Papel de filtro                 - Giemsa
- Vidrio reloj                      - Microscopio óptico

3. HIPÓTESIS

Se observará una capa homegénea de células sanguíneas que se podrán distinguir con facilidad. Se podrá observar los glóbulos rojos de un color rojizo y de un color más claro leucocitos.

4. OBJETIVOS GENERALES Y ESPECÍFICOS

Aprender a realizar un frotis con nuestra propia sangre y familiarizarse con el material de laboratorio. Descubrir y informarse sobre el compuesto químico y el tinte utilizado. También se busca conocer las diferentes células sanguíneas y sus funciones, además de observarlas en el microscopio.

5. MÉTODO DE EXPERIMENTACIÓN

 1. Preparación del material que se utilizará posteriormente y colocación de guantes y de bata de laboratorio.

 2. Se desinfecta el dedo anular o indice con alcohol y un trozo de algodón y se pincha con la lanceta. (después de cada utilización la aguja de la lanceta se tiran)

Foto 1:  Punción con la lanceta para la
 posterior obtención de sangre



3. Se deposita una gota de sangre en el portaobjetos sobre un vidrio reloj y se realiza la extensión del frotis cuidadosamente con ayuda de un cubreobjetos dejando una fina capa de sangre. (se limpia bien el dedo después de obtener la muestra de sangre)

                                                     
                                                 Foto 2: Extensión de la gota de sangre
 para preparar el frotis



4. Con ayuda de una pipeta o cuentagotas se cubre la muestra con metanol y se deja secar unos 3min.

    
        Foto 3: Pocillos con Metanol y Giemsa                Foto 4: Se añade Metanol hasta cubrir la
                                                                                     muestra, con un cuentagotas o con una pipeta



5. Se tiñe la muestra con Giemsa y se deja reposar durante 15min.

                                               
 Foto 5: Muestra cubierta de Giemsa,
 sobre un vidrio reloj


6. Se retira el exceso de tinte con agua haciendo servir una pipeta o cuentagotas.

                                                    
Foto 6: Quitando el exceso de tinte con 
ayuda de una botella con boquilla fina y agua


7. Se coloca un cubreobjetos limpio encima de la muestra.
8. Se observan y fotografían los resultados.
9. Terminada la practica se limpia el material y se guarda en su lugar.

6. OBTENCIÓN DE RESULTADOS

 
Foto 7: Vista desde el microscopio del frotis, 
aumentos ocular 10x y objetivo 4x





Foto 8: Muestra de Paula O. y Andrea Sánchez, 
ocular 10x y objetivo 4x





Foto 9: Muestra de Beatriz Martínez y Francisco Reina,
 ocular 10x y objetivo 10x






           
Foto 10: Muestra Paula Oliver y Andrea Sánchez,
ocular 10x y objetivo 10x






7. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Se pueden observar una gran abundancia de glóbulos rojos en la muestra, poco dispersos además. Se trata de las esferas de color morado claro. También ha sido posible observar leucocitos, de número bastante inferior al de los glóbulos rojos y de un coloro morado intenso. Podemos observar varios leucocitos en el centro de la fotografía 8 y en la parte superior derecha de la 9. Estos dos tipos de células tienen un tamaño muy similar.Por otra parte, también se han podido observar plaquetas, en la fotografía 10. Se trata de las células circulares de un color morado intenso, con un tamaño visiblemente menor al de las células anteriores.

8.CONCLUSIONES

La práctica del frotis de sangre a permitido observar y determinar algunas de las diferentes células de la sangre como los glóbulos rojos y los leucocitos. Se observado una capa de células más o menos homogénea. También se ha aprendido sobre esta técnica y sobre las células sanguíneas.


9. ERRORES DE LA PRÁCTICA

Durante la practica se han cometido errores como la falta de tiempo en el reposo de la muestra. También se ha utilizado material no esterilizado y medidas no exactas.Además se tuvo que volver a coger una muestra de sangre debido a que la primera vez se secó antes de añadirle el metanol.

10. CONFIRMACIÓN O RECHAZO DE NUESTRA HIPÓTESIS

Se confirma en parte la hipótesis ya que se ha obtenido una capa de células sanguíneas más o menos homogénea pero no han podido distinguirse claramente todas la células sanguíneas. Solo glóbulos rojos y leucocitos. Estos tenían un color morado por el tinte y no rojizo.


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